植物基因组DNA提取(植物基因组dna提取及电泳分析)

赖和慈网友提问：

植物基因组DNA提取

优质答案：

植物基因组ＤＮＡ提取

摘要 介绍在教学实验中别离采用SDS法和CTAB法对辣椒基因DNA进行提取的过程，结果表白，改进的CTAB法提取的DNA含量较高且纯度较好；同时发现在电泳检测过程中，恒定电流检测图像结果中呈现的基因组DNA条带要比恒定电压检测结果平整。

关键词 辣椒；DNA；电泳

中图分类号：G六四二.四二三 文献标识码：A 文章编号：一六七一-四八九X（二零零八）二零-零一二七-零二

DNA提取是进行分子生物学研究的第1步，也是大学生必需掌握的专业实验技能。现有的植物DNA提取方法很多，在教学过程中可按照材料自己特点的差别而选择差别的方法。目前使用较多的是SDS（十2烷基硫酸钠）法、CTAB（十6烷基3甲基溴化胺）法[一]，主要用于草本植物和不含酚类或含酚类较少的植物DNA提取。在辣椒基因组DNA提取过程中，由于叶片中富含的酚类物质可使DNA降解，也可与DNA结合形成沉淀物，严重影响DNA的提取效果[二-三]。本文以教学实验植物基因组DNA提取中SDS方法[四]为基础，然后利用改进的CTAB（十6烷基3甲基溴化胺）法提取辣椒基因组DNA与之进行比力，摸索适合辣椒基因组DNA提取的方法，以便更好地办事于实验教学。

一 材料与方法

一.一 实验材料以常规辣椒品种保加利亚尖椒幼嫩叶片为实验材料，采集新鲜叶片数片洗净后再用去离子水清洗二次，晾干，置于四 ℃冰箱冷藏室内备用。

一.二 方法

一.二.一 DNA提取

一）SDS（十2烷基硫酸钠）法见参考文献[四]。

二）CTAB（十6烷基3甲基溴化胺）法[五]。

①称取干燥新鲜叶片约零.四 g置于干净的研钵中，剪成小片，加液氮充分研磨约八 min，至粉末呈浅灰绿色即可。

②将磨碎的粉末等量分装于四个一.五 mL的微量离心管中，各加一 mL预热（约五零 ℃）的二×CTAB缓冲液[含二% CTAB（Cetyltrimethy Ammonium Bromide，Sigma），一.四 mol/L NaCl，二五 mmol/L EDTA，一零零 mmol/L Tris-Cl，pH八.零，零.二%β-巯基乙醇（V/M）]，充分摇匀。

③六零 ℃保温一.五 h，每隔一五 min～二零 min摇匀1次。然后室温放置三零 min，其间摇动一～二次。

④一零 零零零 r/min离心五 min，弃沉淀，取上清液移至新管，加氯仿-异戊醇至满管，并用力摇匀。

⑤一零 零零零 r/min离心一零 min，弃沉淀，取上清液移至新管，加氯仿-异戊醇至满管，并用力摇匀。

⑥一零 零零零 r/min离心一零 min，弃沉淀，取上清液。先加一/一零体积预冷（四 ℃）的三 mol/L NaAc，再加预冷（四 ℃）的异丙醇至新管，将离心管轻轻翻转几次（约五 s），-二零 ℃放置二 h以上或过夜。

⑦一零 零零零 r/min离心一零 min，弃上清液，沉淀用七零%乙醇洗脱二次，再用无水乙醇洗脱1次。晾干（或用灭菌过的滤纸吸干）后，加五零 μL 一×TE溶液溶解。

⑧参加一 μL 一零 mg/mL的RNase溶解DNA，三零 ℃水浴或室温一 h去除RNA，置-二零 ℃生存备用。

一.二.二 电泳检测在恒定电压（八零 V）或恒定电流（八零 mA）的条件下，取五 μL DNA加二 μL上样缓冲液，于一%的琼脂糖凝胶（含零.五 μg/μL EB）中电泳检测，用凝胶成像系统生存图像，通过带形分析来比力DNA的完整性等质量特点。

二 结果分析

如图所示，经SDS法、CTAB法提取辣椒基因组DNA均获得成功（图一、图二），但通过带形分析，等量DNA经电泳检测后亮度呈现差别，表白这两种方法提取的DNA总量有较大不同。由图二可知，CTAB法提取的DNA含量较高且纯度较好，能直接用于PCR、RAPD和RFLP等分子实验。

此外，在实验中还发现，恒定电流条件下DNA条带比恒定电压电泳结果平整，表白在此实验中恒定电流更适合于电泳检测。

三 讨论

DNA提取方法主要是采用破壁和破膜的方法，SDS、CTAB等去污剂均能够破坏细胞膜使蛋利剑质沉淀下来，从而释放DNA；同时在1定的盐浓度下，它们也可以沉淀色素和多糖。本研究表白，在富含酚类物质的辣椒叶片DNA提取过程中，改进的CTAB法提取的DNA含量较高且纯度较好，比SDS法好。所以在以后的实验教学过程中，1般应采用CTAB法，因为CTAB法不仅简便、快速，并且DNA产量高，适用于1般分子生物学操作。

在电泳过程中，将电泳仪调至水平，然后在恒定电压条件下进行电泳检测，多次DNA条带电泳结果均呈现1定程度的不服整现象。在采用CTAB法提取DNA后，采用恒定电流的条件进行电泳检测，结果大有改观。出现此现象的原因可能是在电泳过程中电泳液和凝胶温度不停升高，导致电阻变化，从而引起电流不不变造成的。

通过研究表白，用改进的CTAB法提取植物基因组DNA，在恒流电泳的条件下DNA电泳检测更有利于植物基因组DNA提取的实验教学，可以进1步在实验中推广使用。

参考文献

[一]王关林,等.植物基因工程原理与技术[M].第2版.北京:科学出版社,二零零二,七四二-七四九

[二]Proberki S L, Bailey G, Baum R B. Modification of a CTAB extraction protocol for plant containinghigh polysaccharide and polyphenol components[J].Plant Mol Rep,一九九七(一二):八-一五

[三]王岩,等.辣椒叶片DNA提取方法的优化[J].长江蔬菜,二零零六,八:五九-六一

[四]魏群,等.分子生物学实验指导[M].北京:高等教育出版社,一九九九,六九-七零

[五]李建武,等.生物化学实验原理和方法[M].北京:北京大学出版社,二零零一,二六四-二六五

【用基因给植物换口味】

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